Sav proteáz
  • Sav proteázSav proteáz

Sav proteáz

Ezt a savas proteázt használjuk a fehérje aktivitásának meghatározására, amelyet hemoglobin egységben fejezünk ki tirozin alapon (HUT).

Küldjön értesítést    PDF DownLoad

termékleírás


Alkalmazás és elv

Ezt a savas proteázot használják az Aspergillus oryzae var és az Aspergillus niger var származékainak fehérjebontásának aktivitásának meghatározására, hemoglobin egységekben kifejezve tirozin alapon (HUT), és más proteázok aktivitásának meghatározására pH 4,7 mellett. . A teszt egy hemoglobin szubsztrát 30 perc periódusos enzimatikus hidrolízisén alapul, pH 4,7 és 40 ° C mellett. A hidrolizálatlan szubsztrátumot triklór-ecetsavval kicsapjuk és szűréssel eltávolítjuk. A szűrletben az oldott hemoglobin mennyiségét spektrofotometriásan határozzuk meg.


Reagensek és savas proteáz oldatok
Hemoglobin Használjon hemoglobin szubsztrátport (Sigma Chemical Co., katalógusszám: H2625) vagy hasonló, kiváló minőségű anyagot, amely vízben teljesen oldódik.
Acetát-pufferoldat. Oldjon fel 136 g nátrium-acetátot (NaC2H3O2-3H2O) annyi vízben, hogy 500 ml-t nyerjen. Keverjük össze az oldat 25,0 ml-ét 50,0 ml 1 M ecetsavval, hígítsuk 1000 ml-re vízzel, és keverjük össze. Az oldat pH-jának 4,7 ± 0,02-nek kell lennie.
Szubsztrátoldat 4,0 g hemoglobint viszünk át egy 250 ml-es főzőpohárba, adjunk hozzá 100 ml vizet, és 10 percig keverjük, hogy feloldódjon. Merítse a pH-mérő elektródáit az oldatba, és folyamatos keverés közben állítsa a pH-t 1,7-re 0,3 N sósav hozzáadásával. 10 perc elteltével a pH-t állítsuk 4,7-re 0,5 M nátrium-acetát hozzáadásával. Töltsük az oldatot egy 200 ml-es mérőlombikba, hígítsuk vízzel térfogatra és keverjük össze. Ez az oldat hűtés közben körülbelül 5 napig stabil.
Triklór-ecetsav-oldat. Oldjon fel 140 g triklór-ecetsavat körülbelül 750 ml vízben. Töltsük az oldatot egy 1000 ml-es mérőlombikba, vízzel térfogatra hígítsuk, és alaposan keverjük össze.

A minta előkészítése A minta egy részét oldjuk fel az acetát pufferoldatban, hogy minden ml-ben 9 és 22 HUT közötti oldatot kapjunk. (Egy ilyen koncentráció abszorbancia-leolvasást eredményez az alábbi eljárás szerint, az előnyös 0,2-0,5 tartományban.)


A savas proteáz eljárása
Pipettázzon 10,0 ml szubsztrátoldatot a 25–150 mm-es kémcsövek sorozatába: egyet minden enzimvizsgálathoz, egyet pedig a szubsztrát vakpróbához. Melegítsük a csöveket vízfürdőben 40 ° -on kb. 5 percig. Mindegyik csőhöz, a szubsztrát vak kivételével, adjon 2,0 ml minta-előkészítést, és kezdje meg a reakció időzítését az oldat hozzáadásának pillanatában; adjon 2,0 ml acetát pufferoldatot a szubsztrát üres csőjéhez. Zárja le a csöveket a 4. számú gumidugóval, és minden csövet finoman 30 másodpercig koppintson a tenyerével a keveréshez. Melegítsen minden csövet vízfürdőben 40 ° -on, pontosan 30 percig, majd pipettázzon gyorsan 10,0 ml triklór-ecetsav-oldatot mindegyik csőbe. Minden csövet erőteljesen rázzon a dugóval 40 másodpercig, majd hagyja szobahőmérsékletre hűlni 1 órán át, és minden egyes csövet 10-12 perces időközönként rázzon a dugóra. Az enzim-vakokat az alábbiak szerint készítjük el: Külön csövekben 10,0 ml szubsztrátoldatot és kb. 5 ml mintakészítményt melegítsünk vízfürdőben 30 percig, majd adjunk hozzá 10,0 ml triklór-ecetsavoldatot a szubsztrátoldathoz, alaposan rázzuk össze 40 másodpercig, és ehhez az elegyhez adjon 2,0 ml előmelegített mintát. Újra rázzuk, és szobahőmérsékleten 1 órán át hűtsük, 10-12 perces időközönként rázva.
1 óra elteltével minden csövet erőteljesen rázzunk össze, és szűrjük át 11 cm-es Whatman No. 42 vagy azzal egyenértékű szűrőpapíron, és a szűrlet első felét ugyanazon a papíron szűrjük át. Meghatározzuk az egyes szűrletek abszorbanciáját 1 cm-es cellában, 275 nm-en, megfelelő spektrofotométerrel, a szubsztrát vakpróba szűrletének felhasználásával a műszer nullára állításához. Javítsa ki az egyes leolvasott értékeket a megfelelő enzim vak olvasatának levonásával, és rögzítse az így kapott értéket AU-ként.
[Megjegyzés: Ha nem kapunk korrigált abszorbancia-leolvasást 0,2 és 0,5 között, ismételjük meg a tesztet, ha szükséges, az enzimkészítmény többé-kevésbé felhasználásával.

Standard görbe 100,0 mg kromatográfiás minőségű vagy azzal egyenértékű (Aldrich Chemical Co.), előzőleg állandó tömegig szárított L-tirozint töltsön át egy 1000 ml-es mérőlombikba. Oldjuk fel 60 ml 0,1 N sósavban. Amikor az L-tirozin teljesen feloldódott, az oldatot vízzel hígítsuk térfogatra és alaposan keverjük össze. Ez az oldat 100 µg tirozint tartalmaz 1,0 ml-ben. Készítsen további három hígítást ebből a törzsoldatból 75,0, 50,0 és 25,0 ug tirozin / ml tartalomra. Meghatározzuk a négy oldat abszorbanciáját 275 nm-en, 1 cm-es cellában, megfelelő spektrofotométerrel 0,006 N sósavval szemben. Készítsen egy diagramot az abszorbancia és a tirozin koncentrációja között. Határozza meg a görbe meredekségét a tirozin µg-jére eső abszorbancia alapján. Szorozza meg ezt az értéket 1,10-gyel, és rögzítse AS-ként. Körülbelül 0,0084 értéket kell kapni.


A sav proteáz kiszámítása
Egy HUT egység proteolitikus (sav proteáz) aktivitás az az enzimmennyiség, amely 1 perc alatt, a meghatározott körülmények között olyan hidrolizátumot termel, amelynek abszorbanciája 275 nm-nél megegyezik az 1,10 µg / ml tirozint 0,006 N sósavban tartalmazó oldattal.
Számítsa ki a HUT-t az eredeti enzimkészítmény g-jére az egyenlettel

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

amelyben 22 a vizsgálati oldat végső térfogata; 30 a reakcióidő percben; és W az eredeti minta tömege g-ben.

[Megjegyzés: Az AS értéke gondosan ellenőrzött és szabványosított körülmények között 0,0084; ez az érték használható a rutinmunkákhoz a standard görbéből kapott érték helyett, de a pontosabb eredmények és kétség esetén a standard görbéből számított pontos értéket kell használni.]


VIZSGÁLATI JEGYZŐKÖNYV


termék név Sav proteáz    
Másik név N / A Származási ország Kína
Törzs Aspergillus oryzae Gyártás dátuma 2019. május 13
Tétel száma SP19050903 Lejárati dátum 2021. május 12
Csomag 25 kg / vödör Mennyiség 100 kg
JEGYZŐKÖNYV MŰSZAKI ADATOK EREDMÉNYEK MÓDSZER
FIZIKAI ÉS KÉMIAI ELEMZÉS
Leírás barna por Megfelel Vizuális
Szag és íz Jellegzetes szag és íz Megfelel Íz
Nedvesség NMT 7% 5,1% Nedvesség elemző
AZONOSÍTÁS
Azonosítható tevékenység Pozitív a Bromelain-aktivitás szempontjából Megfelel Házon belül
TEVÉKENYSÉG
Proteáz aktivitás 500 000 NLT NUT / g 508 270 HUT / g FCC VII
MIKROBIOLÓGIAI
Az összes baktérium számít
Coliform baktériumok (CFU / g)
Penész és élesztő
E.Coli
Salmonella
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
NMT 3000 CFU / g
NMT 30 CFU / g
NMT 100 CFU / g
Hiányzó
Hiányzó
Hiányzó
Hiányzó
500 CFU / g
10 CFU / g
10 CFU / g
Nem található
Nem található
Nem található
Nem található
FDA BAM Online Ch.3
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch. 2
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch.5
FDA BAM Online 12. fejezet
AOAC
NEHÉZ FÉMEK
Vezet
Higany
Kadmium
Arzén
NMT 3 ppm
NMT 0,1 ppm
NMT 1 ppm
NMT 1 ppm
0,21 ppm
0,1 ppm
1 ppm
1ppm
USP231>
USP231>
USP231>
USP231>
Tárolás: Hűvös, száraz, fénytől védett helyen tárolja, tartsa a dobot közel, ha nem használja.
Következtetés: Megfelel az IU szabványoknak.
Felhasználhatósági időtartam: A savas proteáz eltarthatósága az előírt tárolási körülmények között és légmentesen lezárva 2 év.
A termék megfelel a fenti előírásoknak
RICKY H. ZHU hivatalos aláíró jóváhagyta
*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of sav proteáz. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Csomagolás és tárolás

Szilárd élelmiszer csomagoló zsák, 25 kg / hordó.


A savas proteázt száraz, hűvös és jól szellőző helyen, a naptól, hőtől távol kell tárolni.

Fizetés :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay később, LC és így tovább

Hot Tags: Savproteáz, Gyártók, Beszállítók, Nagyker, Vásárlás, Gyár, Testreszabott, Raktáron, Tömeges, Ingyenes minta, Márkák, Kína, Kínában gyártott, Olcsó, Kedvezmény, Alacsony ár, Kedvezmény, Ár, Árlista, Ajánlat, GMP, Minőség, legújabb eladások, kétéves eltarthatóság

Kapcsolódó kategória

Küldjön értesítést

Kérem, nyugodtan adhatja meg az érdeklődését az alábbi űrlapon. 24 órán belül válaszolunk.