Lúgos proteáz
  • Lúgos proteázLúgos proteáz

Lúgos proteáz

Az alkáli-proteázt száraz, hűvös és jól szellőző helyen, a naptól, hőtől távol kell tárolni.

Küldjön értesítést

termékleírás


Alkalmazás és elv

Ezt az alkáli proteázot alkalmazzák a Bacillus subtilis var. és Bacillus licheniformis var. A vizsgálat a kazein 30 perces proteolitikus hidrolízisén alapul 37 ° C-on és pH 7,0-nál. A hidrolizálatlan kazeint szűréssel eltávolítjuk, és az oldott kazeint spektrofotometriásan határozzuk meg.


Reagensek és alkáli proteáz oldatok
Kazein Használjon Hammarsten minőségű kazeint (United States Biochemical Corp., katalógusszám: 12840, vagy azzal egyenértékű).
Trisz puffer (pH 7,0) 12,1 g enzimminőségű (vagy azzal egyenértékű) trisz (hidroxi-metil) -amino-metánt oldunk 800 ml vízben, és titráljuk 1 N sósavval pH 7,0-ra. Töltsük át egy 1000 ml-es mérőlombikba, hígítsuk vízzel térfogatra és keverjük össze.
TCA-oldat. Oldjon fel 18 g triklór-ecetsavat és 19 g nátrium-acetát-trihidrátot 800 ml vízben, 1000 ml-es mérőlombikban, adjon hozzá 20 ml jégecetet, vízzel térfogatra hígítsa, és keverje össze.
Szubsztrátoldat. Oldjon fel 6,05 g enzimminőségű trisz (hidroxi-metil) -amino-metánt 500 ml vízben, adjon hozzá 8 ml 1 N sósavat és keverje össze. Oldjunk fel 7 g kazeint ebben az oldatban, és 30 percig forraljuk forrásban lévő vízfürdőben, alkalmanként megkeverve.
Lehűtjük szobahőmérsékletre, és a pH-t 7,0-re állítjuk 0,2 N sósavval, a sav hozzáadásához lassan, erőteljes keverés mellett, hogy megakadályozzuk a kazein kicsapódását. Tegyük az elegyet egy 1000 ml-es mérőlombikba, vízzel térfogatra hígítsuk, és keverjük össze.

A minta előkészítése Tris puffer segítségével készítsen egy oldatot a minta enzimkészítményből úgy, hogy a végső hígítás 2 ml-je 10 és 44 bakteriális proteáz egységet tartalmazzon.


Alkalikus proteáz eljárása
Pipettázzon 10,0 ml szubsztrátoldatot a 25–150 mm-es kémcsövek sorozatába, lehetővé téve egy csövet minden enzimvizsgálathoz, egy csövet minden egyes enzim-vakhoz és egy csövet egy szubsztrát-vakhoz. Kiegyensúlyozzuk a csöveket 15 percig 37 ° ± 0,1 ° ° hőmérsékleten tartott vízfürdőben.
A stoppert nulla időpontban indítva gyorsan pipettázzon 2,0 ml minta-előkészítést az egyensúlyi szubsztrátumba. Keverje össze és helyezze vissza a csöveket a vízfürdőbe. Adjon hozzá 2 ml Tris puffert (a minta előkészítése helyett) az aljzat blankjához. Pontosan 30 perc elteltével adjon 10 ml TCA-oldatot minden egyes enziminkubáláshoz és a szubsztrát vakanyagához a reakció leállításához. A csöveket további 30 percig melegítsük a vízfürdőben, hogy a fehérje teljesen koaguláljon.
A második hevítési periódus végén minden csövet erőteljesen rázzunk, és szűrjük át 11 cm-es Whatman No. 42 vagy azzal egyenértékű szűrőpapíron, az első 3 ml szűrletet eldobva.
[Megjegyzés: A szűrletnek teljesen tisztának kell lennie.]
Meghatározzuk az egyes mintaszűrők abszorbanciáját 1 cm-es cellában, 275 nm-en, megfelelő spektrofotométerrel, a szubsztrát vakpróba szűrletének felhasználásával a műszer nullára állításához. Javítsa ki az egyes leolvasott értékeket a megfelelő enzim vak olvasatának levonásával, és rögzítse az így kapott értéket AU-ként.

Standard görbe 100,0 mg kromatográfiás minőségű vagy azzal egyenértékű (Aldrich Chemical Co.), előzőleg állandó tömegig szárított L-tirozint töltsön át egy 1000 ml-es mérőlombikba. Oldjuk fel 60 ml 0,1 N sósavban. Amikor teljesen feloldódott, hígítsa az oldatot vízzel térfogatra, és alaposan keverje össze. Ez az oldat 100 µg tirozint tartalmaz 1,0 ml-ben. Készítsen további három hígítást ebből a törzsoldatból 75,0, 50,0 és 25,0 ug tirozin / ml tartalomra. Meghatározzuk a négy oldat abszorbanciáját 275 nm-en, 1 cm-es cellában, megfelelő spektrofotométerrel 0,006 N sósavval szemben. Készítsen egy diagramot az abszorbancia és a tirozin koncentrációja között.


Lúgos proteáz kiszámítása
Az egyik bakteriális proteáz egység (PC) az az enzimmennyiség, amely 1,5 µg / ml L-tirozin / perc ekvivalens mennyiséget termel a teszt körülményei között.
A standard görbéből és interpolációval határozzuk meg egy 60 µg / ml tirozin-koncentrációjú oldat abszorbanciáját. 0,0155 közeli értéket kell kapni. Osszuk el az interpolált értéket 40-gyel, hogy megkapjuk az abszorbancia értékét, amely megegyezik egy 1,5 µg / ml tirozin-koncentrációjú oldat abszorbanciájával, és rögzítsük az így kapott értéket AS-ként.
Számítsa ki a minta enzimkészítmény aktivitását az egyenlettel

PC / g = (AU / AS) ((22 / 30W)

amelyben 22 a reakcióelegy végső térfogata, ml-ben; 30 a reakció ideje percben, percben; és W az eredeti minta tömege g-ben.

Alkáli proteáz csomagolása és tárolása

Szilárd élelmiszer csomagoló zsák, 25 kg / hordó.


Az alkáli-proteázt száraz, hűvös és jól szellőző helyen, a naptól, hőtől távol kell tárolni.

Fizetés :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay később, LC és így tovább

Hot Tags: Alkáli proteáz, Gyártók, Beszállítók, Nagyker, Vásárlás, Gyár, Testreszabott, Raktáron, Tömeges, Ingyenes minta, Márkák, Kína, Kínában gyártott, Olcsó, Kedvezmény, Alacsony ár, Kedvezmény, Ár, Árlista, Ajánlat, GMP, Minőség, legújabb eladások, kétéves eltarthatóság

Kapcsolódó kategória

Küldjön értesítést

Kérem, nyugodtan adhatja meg az érdeklődését az alábbi űrlapon. 24 órán belül válaszolunk.