Fitáz
  • FitázFitáz

Fitáz

A fitázt száraz, hűvös és jól szellőző helyen, a naptól, hőtől távol kell tárolni.

Küldjön értesítést    PDF DownLoad

termékleírás


A fitáz alkalmazása és elve

Ezt az eljárást használják a fitátból foszfátot felszabadító enzimek aktivitásának meghatározására. A vizsgálat alapja a nátrium-fitát enzimatikus hidrolízise ellenőrzött körülmények között, a felszabaduló orto-foszfát mennyiségének mérésével.


Reagensek és megoldások 
[Megjegyzés: A foszfátmentesség biztosítása érdekében minden üvegedényt savval kell mosni, ki kell öblíteni és alaposan meg kell tisztítani.
Acetátpuffer (pH 5,5) 1,76 g 100% -os ecetsavat (C2H4O2), 30,02 g nátrium-acetát-trihidrátot (C2H3O2Na-3H2O) és 0,147 g kalcium-klorid-dihidrátot oldunk fel 900 ml vízben. Töltsük az oldatot egy 1000 ml-es mérőlombikba, hígítsuk vízzel térfogatra és keverjük össze. A pH-nak 5,50 ± 0,05-nek kell lennie.
Szubsztrátoldat. Oldjunk fel 8,40 g nátrium-fitát-dekahidrátot (C6H6O24P6Na12 · 10H2O) (Sigma Chemical Co.) 900 ml acetátpufferben. Állítsuk a pH-t 5,50 ± 0,05-re 37,0 ° ± 0,1 ° -on 4 M ecetsav hozzáadásával. Hűtsük környezeti hőmérsékletre. Vigye az elegyet mennyiségileg egy 1000 ml-es mérőlombikba, hígítsa acetil-pufferral térfogatra és keverje össze. Készítsen frisset naponta.
Salétromsavoldat (27%) Keverés közben lassan adjon 70 ml 65% -os salétromsavat 130 ml vízhez.
Ammónium-heptamolibdát oldat. Oldjunk fel 100 g ammónium-heptamolibdát-tetrahidrátot ((NH4) 6Mo7O24 · 4H2O] 900 ml vízben, 1000 ml-es mérőlombikban. Adjunk hozzá 10 ml 25% -os ammóniaoldatot, vízzel térfogatra hígítsuk és keverjük össze. Ez az oldat szobahőmérsékleten és fénytől védve 4 hétig stabil.
Ammónium-vanadát oldat. Oldjon fel 2,35 g ammónium-monovanadátot (NH4VO3) 400 ml meleg (60 °) vízben. Keverés közben lassan adjon hozzá 20 ml salétromsavoldatot (27%). Hűtsük környezeti hőmérsékletre. Az elegyet kvantitatív módon töltsük át 1000 ml-es mérőlombikba, vízzel térfogatra hígítsuk és keverjük össze. Ez az oldat szobahőmérsékleten és fénytől védve 4 hétig stabil.
Szín / Stop oldat Keverés közben adjon 250 ml ammónium-vanadát oldatot 250 ml ammónium-heptamolibdát oldathoz. Lassan adjon hozzá 165 ml 65% -os salétromsavat. Hűtsük környezeti hőmérsékletre. Az elegyet kvantitatív módon töltsük át 1000 ml-es mérőlombikba, vízzel térfogatra hígítsuk és keverjük össze. Készítsen frisset naponta.
Kálium-dihidrogén-foszfát-oldat Megfelelő mennyiségű kálium-dihidrogén-foszfát (KH2PO4) szárítását vákuumkemencében 100 ° C és 104 ° C között 2 órán át végezzük. A szárított szilikagél felett exszikkátorban szobahőmérsékletre hűtjük.
Két példányban (A és B oldat) mérjünk meg kb. 0,245 g szárított kálium-dihidrogén-foszfátot pontosan 1 mg-ig, és hígítsuk acetátpufferrel 1 literre, hogy 1,80 mmol / l kálium-dihidrogén-foszfátot tartalmazó oldatokat kapjunk.
Fitáz-referencia készítmény (erősen koncentrált fitáz-készítmény) Ez a készítmény a Gist-Brocades cégtől (Delft, Hollandia) szerezhető be hozzárendelt aktivitással (kooperatív vizsgálattal), vagy a referencia-készítmény aktivitását a 2. eljárással lehet meghatározni.
Fitáz-összehasonlító oldatok, 1. eljárás Mérjünk le 20000 fitázegységnek megfelelő mennyiségű fitáz-referencia készítményt pontosan 1 mg-os pontossággal, kétszer 200 ml-es mérőlombikokban. Oldjuk fel és hígítsuk a térfogatra acetátpufferrel, és keverjük össze. Hígítsuk acetátpufferrel, hogy körülbelül 0,01, 0,02, 0,04, 0,06 és 0,08 fitázegységet tartalmazó hígításokat kapjunk a végső hígítás 2,0 ml-jére számítva.
A minta előkészítése, 1. eljárás Szuszpendáljon vagy oldjon fel, és hígítson pontosan kimért mennyiségű mintát acetátpufferben úgy, hogy a végső hígítás 2,0 ml-je 0,02-0,08 fitázegységet tartalmazzon.

A minta előkészítése, 2. eljárás Két példányban mérje meg pontosan a fitáz-referencia készítmény mennyiségét, majd oldja fel és hígítsa acetátpufferben, hogy 0,06 ± 0,006 fitázegységet tartalmazó hígításokat kapjon 2,0 ml végső hígításban.


Eljárások
1. eljárás (a fitázaktivitás meghatározása) Töltsön át 2,00 ml 1. minta-előkészítési mintát és az 1. eljárás fitáz-referenciaoldatait külön 20 × 150 mm-es üveg kémcsövekbe. Stopper használatával és az időpontban nullával történő indítással, a sorrendben és rendszeres időközönként helyezzük a csöveket 37,0 ° ± 0,1 ° -os vízfürdőbe, és hagyjuk, hogy tartalmuk 5 percig egyensúlyba kerüljön. Amikor az idő 5 perc, a sorozat azonos sorrendjében és azonos időintervallumokkal adjon minden kémcsőbe 4,0 ml (előzőleg 37,00 ± 0,10-re kiegyensúlyozott) szubsztrátoldatot. Keverjük össze, és tegyük vissza a 37,0 ° ± 0,1 ° vízfürdőbe. Az idő 65 perc, ugyanabban a sorrendben és ugyanabban az időintervallumban, fejezze be az inkubációt 4,0 ml Color / Stop oldat hozzáadásával. Keverjük össze, majd hűtsük környezeti hőmérsékletre.
Az üres elemeket úgy készítjük el, hogy 2,00 ml minta-előkészítést (1. eljárás) és a fitáz-referenciaoldatokat (1. eljárás) külön 20–150 mm-es üvegcsövekbe töltünk. Stopper használatával és az időpontban nullának indulva, a sorozat sorrendjében és rendszeres időközönként helyezze a csöveket 37,0 ° ± 0,1 ° -os vízfürdőbe, és hagyja 5 percig egyensúlyba lépni. 5 percen belül, a sorozat azonos sorrendjében és ugyanabban az időintervallumban adjunk hozzá 4,0 ml Color / Stop oldatot. Keverjük össze, majd hűtsük környezeti hőmérsékletre. Ezután adjunk hozzá 4,00 ml szubsztrátoldatot a vak csövekhez, és keverjük össze.
Centrifugáljuk az összes kémcsövet 5 percig 3000 × g sebességgel. Meghatározzuk az egyes oldatok abszorbanciáját 415 nm-en, 1 cm-es úthosszú cellában, megfelelő spektrofotométerrel, víz segítségével a készülék nullázására.
2. eljárás (A fitáz-referencia készítmény fitázaktivitásának meghatározása) 2,00 ml 2. minta-előkészítményt és 2,00 ml-t (háromszor kálium-dihidrogén-foszfát A-oldatból és kétszer B-ből) kálium-dihidrogén-foszfát-oldatokat külön 20 - × 150 mm-es üveg kémcsövek. Stopper használatával és az időpontban nullával történő indítással, a sorrendben és rendszeres időközönként helyezzük a csöveket 37,0 ° ± 0,1 ° -os vízfürdőbe, és hagyjuk, hogy tartalmuk 5 percig egyensúlyba kerüljön. Ha az idő 5 perc, a sorozat azonos sorrendjében és ugyanabban az időintervallumban adjunk hozzá 4,0 ml szubsztrátoldatot (korábban 37,0 ° ± 0,1 ° -ra kiegyensúlyozva) a kémcsövekbe. Keverjük össze, és tegyük vissza a 37,0 ° ± 0,1 ° vízfürdőbe. Az idő 35 perc, ugyanabban a sorrendben és ugyanabban az időintervallumban, fejezze be az inkubációt 4,0 ml Color / Stop oldat hozzáadásával. Keverjük össze, majd hűtsük környezeti hőmérsékletre.

Készítsen elő üres anyagokat úgy, hogy 2,00 ml minta előkészítését (2. eljárás) külön 20–150 mm-es üvegcsövekbe tölt. Készítsen elő egy reagens-vakot úgy, hogy 2,00 ml vizet tölt át öt különálló 20–150 mm-es üvegcső sorozatába. Adjon 4,0 ml Color / Stop oldatot az összes üres csőhöz és keverje össze. Ezután adjon hozzá 4,0 ml szubsztrátoldatot és keverje össze. Meghatározzuk az egyes oldatok abszorbanciáját 415 nm-en, 1 cm-es úthosszú cellában, megfelelő spektrofotométerrel, víz segítségével a készülék nullázására.


Számítások
Számítás, 1. eljárás: Az egyik fitáz (fitáz) egység (FTU) az az enzimmennyiség, amely szervetlen foszfátot 1 µmol / perc sebességgel szabadít fel 0,0051 mol / l nátrium-fitátból 0,0051 mol / l-nél 37,00-nál, pH = 5,50 mellett a teszt körülményei között. Számítsa ki a korrigált abszorbanciát (minta mínusz vak) minden minta előkészítéshez és fitáz referencia oldathoz. Ábrázoljuk az egyes fitáz-referenciaoldatok pontosan kiszámított fitázaktivitását (FTU / 2 ml) a megfelelő abszorbancia alapján. A görbéből határozza meg a fitáz aktivitást az egyes mintakészítményekben (FTU / 2 ml):

Aktivitás (FTU / g) = (FTU / 2 ml Hígítás) / minta tömege (g).


Számítás, 2. eljárás Számítsa ki a korrigált AR abszorbancákat az egyes mintakészítményekhez (abszorbancia fitáz-referenciaoldat mínusz a megfelelő abszorbancia vak) és minden egyes kálium-dihidrogén-foszfát-oldathoz (Ap abszorbanciakálium-dihidrogén-foszfát-oldat mínusz átlagos abszorbancia reagens vak). Számítsa ki a C értéket, az egyes kálium-dihidrogén-foszfát-oldatok foszfátkoncentrációját:

(Szélesség × 1000 × 2) / MW = C (mmol / 2 ml).

Számítsa ki az összes kálium-dihidrogén-foszfát-oldat D-abszorbanciáját a mért kálium-dihidrogén-foszfát-mennyiség korrekciója után:

Ap / C = D (abszorbancia egység / foszfát mmol / 2 ml).

Számítsa ki a D eredmények átlagát, adja meg az E értéket (legnagyobb megengedett különbség, 5%).
Számítsa ki az egyes fitáz-referencia készítmények aktivitását:

(AR × f) / (30 × R × E) = FTU / g,

amelyben az AR megegyezik a fitáz standard oldat korrigált abszorbanciájával; f megegyezik a referencia készítmény teljes hígítási tényezőjével; 30 megegyezik az inkubációs idővel, percben; R megegyezik a minta tömegével, g-ben; E egyenlő a D tényezők átlagával; W megegyezik a kálium-dihidrogén-foszfát tömegével (g); és MW megegyezik a kálium-dihidrogén-foszfát molekulatömegével, 136,09 (g / mol).


VIZSGÁLATI JEGYZŐKÖNYV


termék név Fitáz    
Másik név N / A Származási ország Kína
Törzs Aspergillus niger Gyártás dátuma OKTÓBER. 2019. augusztus 17
Tétel száma SS19101701 Lejárati dátum OKTÓBER. 16 2021
Csomag 25 kg / vödör Mennyiség /
JEGYZŐKÖNYV MŰSZAKI ADATOK EREDMÉNYEK MÓDSZER
FIZIKAI ÉS KÉMIAI ELEMZÉS
Leírás Világossárga vagy világosbarna folyadék Megfelel Vizuális
Szag és íz Jellegzetes szag és íz Megfelel Íz
Nedvesség NMT 7% 4,5% Nedvesség elemző
AZONOSÍTÁS
Azonosítható tevékenység Pozitív a Mananase tevékenység szempontjából Megfelel Házon belül
TEVÉKENYSÉG
Dextranáz aktivitás NLT 5000 FTU / g 5068 FTU / g FCC
MIKROBIOLÓGIAI
Az összes baktérium számít
Coliform baktériumok (CFU / g)
Penész és élesztő
E.Coli
Salmonella
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
NMT 3000 CFU / g
NMT 30 CFU / g
NMT 100 CFU / g
Hiányzó
Hiányzó
Hiányzó
Hiányzó
100
<10
<10
Nem található
Nem található
Nem található
Nem található
FDA BAM Online Ch.3
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch. 2
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch.5
FDA BAM Online 12. fejezet
AOAC
NEHÉZ FÉMEK
Vezet
Higany
Kadmium
Arzén
NMT 3 ppm
NMT 0,1 ppm
NMT 1 ppm
NMT 1 ppm
3 ppm
0,1 ppm
1 ppm
1 ppm
USP231>
USP231>
USP231>
USP231>
Tárolás: Hűvös, száraz, fénytől védett helyen tárolja, tartsa a dobot közel, ha nem használja.
Következtetés: Megfelel az FCC szabványainak. Felhasználhatósági időtartam Az előírt tárolási feltételek és légmentesen lezárt csomagolás ideje 2 év.
A termék megfelel a fenti előírásoknak
RICKY H. ZHU hivatalos aláíró jóváhagyta

Csomagolás és tárolás

Szilárd élelmiszer csomagoló zsák, 25 kg / hordó.


A fitázt száraz, hűvös és jól szellőző helyen, a naptól, hőtől távol kell tárolni.

Fizetés :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, e-Checking, Pay később, LC és így tovább

Hot Tags: Fitáz, Gyártók, Beszállítók, Nagyker, Vásárlás, Gyár, Testreszabott, Raktáron, Tömeges, Ingyenes minta, Márkák, Kína, Kínában gyártott, Olcsó, Kedvezmény, Alacsony ár, Kedvezmény, Ár, Árlista, Ajánlat, GMP, Minőség , Legújabb eladások, kétéves eltarthatóság

Kapcsolódó kategória

Küldjön értesítést

Kérem, nyugodtan adhatja meg az érdeklődését az alábbi űrlapon. 24 órán belül válaszolunk.